Cromatografia de membrana d'intercanvi catiònic fort SP

Introducció als productes de cromatografia de membrana d'intercanvi d'ions-CM febles

 

1. Visió general

La cromatografia d'intercanvi-de cations febles amb CM és una tecnologia de purificació en què els grups carboximetil s'uneixen a la membrana per formar un mòdul funcional. La separació s'aconsegueix a partir de les diferències en les propietats de càrrega i densitats de càrrega de diverses biomolècules. Com que la majoria de macromolècules biològiques contenen grups carboxil o hidroxil, les seves característiques de càrrega i magnitud es poden ajustar canviant el valor de pH de la solució tampó. Després que les biomolècules s'uneixin al mòdul de membrana que porta càrregues oposades, l'elució es realitza alterant la força iònica o el pH de la fase mòbil. Les molècules amb afinitat d'unió més feble s'elueixen primer, mentre que les que tenen una afinitat d'unió més forta s'elueixen més tard, aconseguint així una separació efectiva.

 

2. Avantatges del producte

2.1 Ràpid i eficient: es pot aconseguir una gran capacitat d'unió a cabals fins a 40 vegades més ràpid que la cromatografia convencional basada en resina-. En comparació amb la cromatografia de llit-empaquetada tradicional, la cromatografia de membrana pot escurçar el temps de procés entre 30 i 40 vegades. El cabal de funcionament típic és de 10 MV/min.

2.2 Alta eficiència d'unió: la cromatografia de membrana demostra una gran capacitat de càrrega i alts cabals en condicions de baixa caiguda de pressió, permetent capturar biomolècules carregades en un sol pas a través del mòdul.

2.3 Escalable i flexible: la gamma completa de productes de cromatografia de membrana pot satisfer diverses necessitats de processament de biomacromolècules, que cobreixen etapes des del desenvolupament del procés fins a la fabricació a gran-escala. El disseny de la càpsula permet aplicacions d'un sol -ús o es pot netejar i reutilitzar segons sigui necessari.

2.4 Augment de la productivitat: el disseny compacte minimitza l'empremta de la instal·lació. En eliminar els passos d'embalatge, neteja, validació de neteja i emmagatzematge de columnes, el processament pot començar després de l'equilibri amb un volum relativament petit de tampó. Sense necessitat d'embalatge, neteja o emmagatzematge de columnes, els costos laborals es poden reduir fins a més d'un 50%.

 

3 Paràmetres tècnics

3.1 Materials estructurals

	Escala de laboratori	petita escala	Escala pilot	Escala de producció
Volum de membrana	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Estructura de suport de la membrana	Polipropilè
Carcassa de membrana	Polipropilè
Anell O	Cautxú de silicona

3.2 Característiques de funcionament

	Escala de laboratori	petita- escala	Escala pilot-	Escala de producció
Volum de membrana	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Caudal recomanat	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12 l/min	25-150 l/min
Temperatura màxima de funcionament	35 graus
Pressió màxima de funcionament	3 bar (25 graus)
Màxim diferencial de pressió	3 bar (25 graus)
Condicions d'emmagatzematge	Solució aquosa d'etanol al 20%.

En comparació amb els mitjans convencionals, la vida útil de la cromatografia de membrana CM és comparable a la del gel d'agarosa CM 6FF.

Figura 1. Canvis en la capacitat de càrrega de la cromatografia de membrana CM després de múltiples usos en proves de lisozima.

A més, es va avaluar l'eficiència d'eliminació de proteïnes i àcids nucleics de la cèl·lula hoste mitjançant cromatografia de membrana. Els resultats es mostren a continuació.

Taula 1. Taxa d'eliminació d'ADN i proteïnes de cèl·lules hoste en material IgG expressat en CHO- mitjançant cromatografia de membrana CM

Una sèrie d'experiments van demostrar que la cromatografia de membrana CM pot eliminar eficaçment els contaminants mantenint una alta taxa de recuperació d'IgG objectiu.

	ADN				HCP
	Recuperació d'IgG	Contingut (pg/mg d'IgG) per RT PCR		Factor d'eliminació	Contingut (ng/mg d'IgG) per Elisa		Factor d'eliminació
Corre	%	Abans de la membrana Q	Després de la membrana Q	Registre	Abans de la membrana Q	Després de la membrana Q	Registre
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Utilitzant la cromatografia de membrana Gudiling CM en comparació amb altres marques, les dades de capacitat de càrrega es mostren a continuació.

Capacitat de càrrega (mg/ml)	Jingbiao 1	Guiar
Lisozima	18	23
Tripsina	17	20

Taula 2. Rendiment de càrrega de diferents proteïnes del nostre producte en comparació amb els productes de la competència

L'avaluació global mostra que la nostra capacitat de càrrega és comparable a la dels productes importats.

Figura 2. Prova de capacitat de càrrega del mòdul de cromatografia de membrana CM utilitzant lisozima com a proteïna estàndard.

També es va comparar la capacitat de càrrega dinàmica amb la dels productes importats. La verificació va demostrar que el lisozima es podria eluir mitjançant NaCl 160 mM, que permet una captura eficient de la majoria de proteïnes diana.

Mitjançant l'optimització de diferents condicions d'elució, vam trobar que la cromatografia de membrana presenta un comportament d'elució similar a la cromatografia en gel d'agarosa, on la puresa de proteïnes varia significativament sota diferents concentracions de sal. En la pràctica de R+D i producció, és necessari determinar quantitativament les condicions d'elució d'equilibri per obtenir una proteïna objectiu d'alta -puresa.

 

4. Casos d'aplicació típics

• Eliminació d'ADN, virus i proteïnes de la cèl·lula hoste
• Captura de plasmidis, virus i proteïnes, així com purificació d'oligonucleòtids
• Decoloració del brou de fermentació de llevats i captura de proteïnes d'alta{0}}capacitat

 

5. Procediment operatiu / Flux de treball

5.1: Preparació i muntatge d'equips:

5.1.1: Instal·leu el mòdul de cromatografia de membrana en un sistema de cromatografia AKTA. El mètode d'instal·lació és similar als mitjans de cromatografia de llit-empaquetats; Assegureu-vos que la direcció del flux segueix la fletxa marcada al mòdul. El mòdul es pot connectar mitjançant connectors Luer o connectors de pinça.

5.1.2 Establiu el cabal d'entrada entre 5 i 10 MV/min i utilitzeu un tampó d'equilibri per purgar l'aire del mòdul. Continueu rentant fins que no s'observin bombolles a la sortida i, a continuació, connecteu la sortida del permeat al sistema de cromatografia.

5.2.: Preparació prèvia-ús

5.2.1: Establiu el cabal d'entrada a 5-10 MV/min i realitzeu un pretractament amb NaOH 0,5 M durant més de 5 MV per assegurar-vos que la membrana arriba a l'equilibri.

5.2.2: En les mateixes condicions de cabal, realitzeu un pre-tractament amb NaCl 1 M durant més de 5 MV per assegurar-vos que la membrana arribi a l'equilibri.

5.3. Procés de cromatografia

5.3.1 Establiu el cabal d'entrada entre 5 i 10 MV/min i feu un pre-tractament amb tampó d'equilibri durant més de 5 MV fins que la membrana arribi a l'equilibri.

5.3.2 Després de 0,22 μm de pre-filtració, carregueu la mostra a la columna i continueu fins que s'hagi aplicat tota la mostra o s'arribi a la capacitat de càrrega de la cromatografia.

5.3.3 Rentar amb tampó d'equilibri durant més de 10 MV fins que el valor UV disminueixi fins a la línia de base.

5.3.4 D'acord amb el disseny del procés, apliqueu l'elució en gradient o un sistema d'elució lineal i recolliu les fraccions en segments segons sigui necessari.

5.4 Tractament post-ús CIP: CIP (Clean-in-Place) per al sistema de cromatografia de membrana.

5.4.1 Establiu el cabal d'entrada a 5-10 MV/min i tracteu amb NaOH 1 M durant més de 10 MV fins que el valor UV caigui per sota de la línia de base.

5.4.2 Després de 30 minuts de rentat circulant, esbandiu amb aigua fins que el pH estigui entre 7 i 8, després canvieu a etanol al 20% i continueu netejant fins que la conductivitat es mantingui gairebé sense canvis.

5.5 Emmagatzematge per cromatografia de membrana

Després de l'ús i la finalització del CIP, el mòdul de membrana es pot treure i emmagatzemar en remull amb etanol al 20% o emmagatzemat en línia a temperatura ambient en una solució que conté etanol al 20%. La solució d'etanol al 20% s'ha d'inspeccionar i substituir regularment.

 

6, informació de la comanda

Filtre de càpsula de cromatografia de membrana d'intercanvi catiònic feble de tipus CM-

	Escala de laboratori	Petita escala	Escala pilot	Escala de producció
Model	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Zona de membrana	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Etiquetes populars: cromatografia de membrana d'intercanvi catiònic fort sp, Xina, proveïdors, fabricants, fàbrica, venda a l'engròs, a granel, en estoc, mostra gratuïta