Cromatografia de membrana d'intercanvi d'anions febles DEAE

Cromatografia de membrana d'intercanvi d'anions febles DEAE - Introducció al producte

 

1. Visió general

La cromatografia d'intercanvi d'anions febles amb DEAE és una tècnica de purificació basada en diferències en les propietats de càrrega i la densitat de càrrega de diverses biomolècules. Com que la majoria de biomacromolècules contenen grups funcionals com els grups carboxil o hidroxil, les seves característiques de càrrega i magnitud es poden ajustar modificant el pH de la solució tampó. Després que les biomolècules s'uneixin a un medi d'intercanvi d'anions o cations de càrrega oposada, la separació s'aconsegueix canviant la força iònica o el pH de la fase mòbil. Les molècules amb afinitat d'unió més feble s'elueixen primer, seguides per les molècules amb afinitat d'unió més forta, aconseguint així una separació efectiva.

 

2. Avantatges del producte

2.1 Alta eficiència: aconsegueix una unió forta a cabals fins a 40 vegades més grans que la cromatografia basada en resina-. En comparació amb la cromatografia de llit-empaquetada tradicional, la cromatografia de membrana escurça el temps global del procés entre 30 i 40 vegades aproximadament.

2.2 Alta eficiència d'unió: la cromatografia de membrana presenta una gran capacitat d'unió i un alt cabal amb baixa caiguda de pressió, cosa que permet capturar biomolècules carregades en un sol pas a través de la columna.

2.3 Escalable i flexible: la sèrie completa de productes de cromatografia de membrana pot satisfer diverses necessitats de purificació de biomacromolècules, abastant totes les etapes, des del desenvolupament del procés fins a la producció a gran-escala. El disseny estructural tipus càpsula-admet tant l'operació d'un sol-ús com la reutilització després de la neteja.

2.4 Productivitat millorada: el disseny compacte minimitza l'empremta de la instal·lació. Mitjançant l'eliminació dels procediments d'embalatge, neteja, validació de neteja i emmagatzematge de columnes, el sistema es pot operar directament després de l'equilibri del tampó sense empaquetament ni emmagatzematge de la columna. Els costos laborals es poden reduir fins a un 50%.

 

3. Paràmetres tècnics

3.1 Materials estructurals

	escala de laboratori	petita escala	escala pilot	escala de producció
Volum de membrana	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Estructura de suport de la membrana	Polipropilè (PP)
Carcassa de membrana	Polipropilè (PP)
Anell O	Silicona

3.2 Característiques de funcionament

	escala de laboratori	petita escala	escala pilot	Escala de producció
Volum de membrana	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Caudal recomanat	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12 l/min	25-150 l/min
Temperatura màxima de funcionament	35 graus
Pressió màxima de funcionament	3 bar (25 graus)
Pressió diferencial màxima	3 bar (25 graus)
Condicions d'emmagatzematge	Solució aquosa d'etanol al 20% 乙醇水溶液

Figura 1. Canvis en la capacitat de càrrega de la cromatografia de membrana després de múltiples usos monitoritzats amb BSA.

A més, es va avaluar l'eficiència d'eliminació de proteïnes i àcids nucleics de la cèl·lula hoste mitjançant cromatografia de membrana DEAE. Els resultats són els següents.

	ADN				HCP
	Recuperació d'IgG	Contingut (pg/mg d'IgG) per RT PCR		Factor d'eliminació	Contingut (ng/mg d'IgG) per Elisa		Factor d'eliminació
Corre	%	Abans de la membrana DEAE	Després de la membrana DEAE	Registre	Abans de la membrana DEAE	Després de la membrana DEAE	Registre
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Taula 1. Taxa d'eliminació d'ADN i proteïnes de cèl·lules hoste de CHO-IgG expressada mitjançant cromatografia de membrana DEAE.

Una sèrie d'experiments van demostrar que la cromatografia de membrana Q pot eliminar eficaçment les impureses, alhora que es manté una alta taxa de recuperació de la IgG objectiu.

A més, vam comparar la cromatografia de membrana Gudiling amb marques importades i les dades de capacitat de càrrega són les següents.

Figura 2. Rendiment de càrrega de diferents proteïnes a la nostra cromatografia de membrana i productes competidors

L'avaluació global mostra que la nostra capacitat de càrrega és comparable a la dels productes importats.

Figura 3. Rendiment del mòdul de cromatografia de membrana DEAE en proves de proteïnes de col·lagen

Mitjançant el mòdul de cromatografia de membrana DEAE, els resultats de la validació van mostrar que la majoria de proteïnes de col·lagen diana es podrien capturar i eluir mitjançant NaCl 135 mM.

Mitjançant proves en diferents condicions d'elució, vam trobar que la cromatografia de membrana i la cromatografia en gel d'agarosa presenten un comportament d'elució similar, on la puresa de la proteïna varia significativament en diferents concentracions de sal. En la pràctica de R+D i producció, és necessari determinar quantitativament les condicions òptimes d'elució d'equilibri per obtenir proteïnes objectiu d'alta -puresa.

 

4. Casos d'aplicació clàssics

Eliminació d'ADN, virus, proteïnes de la cèl·lula hoste i endotoxines

Captura de plasmidis, virus, àcids nucleics i proteïnes, així com purificació d'oligonucleòtids

 

5. Flux de treball operatiu

5.1: Preparació i muntatge d'equips

5.1.1 El mòdul de cromatografia de membrana s'ha d'instal·lar al sistema de cromatografia AKTA d'una manera similar a les columnes de resina empaquetades, assegurant que la direcció del flux s'alinea amb les fletxes i la direcció d'entrada. Connecteu-vos mitjançant connectors Luer o accessoris de pinça.

5.1.2 Establiu el cabal d'entrada a 5-10 MV/min i utilitzeu el tampó d'equilibri per purgar l'aire. Continueu rentant fins que no s'observin bombolles a la sortida i, a continuació, connecteu la sortida del permeat al sistema de cromatografia.

5.2:Tractament previ{0}}ús

5.2.1: Establiu el cabal d'entrada a 5-10 MV/min i realitzeu un pre-tractament amb NaOH 0,5 M durant més de 5 MV per assegurar-vos que la membrana arribi a l'equilibri.

5.2.2: Amb el mateix cabal, pre-tracteu més amb tampó d'equilibri (1 × PBS) durant més de 5 MV per assegurar-vos que la membrana arribi a l'equilibri.

5.3 Procés de cromatografia

5.3.1

Establiu el cabal d'entrada a 5-10 MV/min i pre-tracteu amb tampó d'equilibri durant més de 5 MV fins que la membrana arribi a l'equilibri.

5.3.2

Després de filtrar la mostra prèviament-a través d'un filtre de 0,22 μm, carregueu-la fins que s'hagi completat la càrrega o s'arribi a la capacitat de càrrega de la cromatografia.

5.3.3

Rentar amb tampó d'equilibri durant més de 10 MV fins que l'absorbància UV disminueixi fins al nivell de referència.

5.3.4

Utilitzeu l'elució en gradient o l'elució lineal segons el disseny del procés i recolliu mostres en fraccions segons sigui necessari.

5.4, ​​Tractament post-ús CIP: CIP del dispositiu de cromatografia de membrana

5.4.1

Establiu el cabal d'entrada entre 5 i 10 MV/min i realitzeu un tractament de neteja-al lloc-(CIP) amb NaOH 0,5 M durant més de 10 MV fins que l'absorbància UV caigui per sota de la línia de base.

5.4.2

Després de circular el rentat durant 30 minuts, canvieu al rentat amb aigua fins que el pH estigui entre 7 i 8 i, a continuació, continueu netejant amb etanol al 20% fins que la conductivitat es mantingui gairebé constant.

5.5, Emmagatzematge de cromatografia de membrana:

Després de l'ús i la finalització del CIP, el mòdul de membrana es pot treure i emmagatzemar en remull amb etanol al 20% o emmagatzemat en línia a temperatura ambient en una solució d'etanol al 20%. La solució d'etanol al 20% s'ha d'inspeccionar i substituir periòdicament.

 

6.Informació de comanda

Filtre de càpsula de cromatografia de membrana d'intercanvi d'anions febles tipus DEAE-

	Escala{0}}de laboratori	petita escala	Escala pilot	Escala de producció
Model de producte	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Volum de membrana	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Etiquetes populars: cromatografia de membrana d'intercanvi d'anions febles deae, Xina, proveïdors, fabricants, fàbrica, venda a l'engròs, a granel, en estoc, mostra gratuïta