Preguntes freqüents sobre els dispositius de filtre centrífug

Q1. Cal separar proteïnes de diferents pesos moleculars, per tant, quanta diferència haurien de necessitar els pesos moleculars de les proteïnes?

R: La mida de les dues proteïnes ha de diferir 10 vegades o més.

 

Q2. Es pot centrifugaralels dispositius de filtre estaran esterilitzats i resistents al rentat alcalí?

R: Es pot esterilitzar amb una solució aquosa d'etanol al 75 per cent, i la membrana pot suportar 0.1-0. 5 N d'hidròxid de sodi alcalí rentat.

 

Q3. Com fer front a si la proteïna precipitava durant la concentració?

R: Si la proteïna es concentra massa ràpid o massa concentrada, pot provocar una precipitació de proteïnes i la concentració final de la proteïna després de la concentració no hauria de ser massa alta; Proteïnes que són sensibles a la taxa de concentració i tendeixen a precipitar, mètode de millora suggerit:

Reduir la velocitat centrífuga

Utilitzeu una membrana d'ultrafiltració amb un tall de pes molecular més elevat

Bufar i xuclar el tub concentrat i després centrifugar

 

Q4. Quina és la possible raó per la qualdispositius de filtre centrífugno es pot centrifugar?

R: Podeu utilitzar una solució aquosa d'etanol al voltant del 20 per cent per a la centrifugació inicial si el tub d'ultrafiltració no es pot centrifugar, perquè la membrana d'ultrafiltració està completament seca, la superfície de la membrana és dèbilment hidròfoba i el flux es pot restaurar després de la infiltració amb un baix dissolvent de tensió superficial.

 

Q5. Mètodes d'ús correcte i emmagatzematge dels dispositius de filtre centrífug

R: Els dispositius de filtre centrífug s'han de centrifugar amb aigua purificada abans d'utilitzar-los per verificar-ne la integritat. Després de cada ús, s'ha d'emmagatzemar en estat humit per evitar que la membrana s'assequi.

 

Q6. Com eliminen les endotoxines els dispositius de filtre centrífug?

R: Els dispositius de filtre centrífug que vam subministrar no s'han tractat amb endotoxines i, com que les endotoxines existeixen àmpliament a la natura, les mostres que requereixen endotoxines es poden netejar prèviament amb hidròxid de sodi 0.5N abans de l'experiment i després rentar-les amb Aigua RO per eliminar la major part de l'endotoxina.

 

Q7. Quan la proteïna concentrada s'utilitza per a l'anàlisi aigües avall, es troba que hi ha interferències, quin és el motiu?

R: Els dispositius de filtre centrífug es poden rentar prèviament amb solució tampó o aigua purificada. Si la interferència encara existeix, renteu-lo amb hidròxid de sodi 0,1N i després amb aigua purificada.

 

Q8. It es troba que no hi ha cap proteïna objectiu al concentrat després de la concentració. Quins són els possibles motius?

R: 1) La concentració inicial de la proteïna no ha de ser massa baixa, si la concentració és massa baixa, és possible que la membrana no es pugui retenir.

2) Seleccioneu la mida de porus de la membrana adequada. La concentració centrífuga del tub de filtre pertany a la filtració sense sortida i la mida dels porus de la membrana generalment és inferior a 2 vegades o més que la proteïna objectiu.

3) Trieu la velocitat centrífuga adequada

4) Si la proteïna diana precipita

 

Q9. Tractament de passivació de dispositius de filtre centrífug

R: El pretractament de passivació de la superfície dels dispositius de filtre centrífug pot reduir la pèrdua d'adsorció de proteïnes a la superfície de la membrana, en la majoria dels casos, el pretractament de la columna abans de concentrar la solució de proteïna diluïda pot millorar la recuperació, ja que la solució pot omplir l'exposició. llocs d'adsorció de proteïnes buits a la membrana i la superfície, el mètode de passivació consisteix a remullar prèviament la columna amb un volum elevat de solució de passivació durant més d'1 hora, rentar la columna bé amb aigua destil·lada i, a continuació, centrifugar la columna una vegada amb aigua destil·lada. per eliminar completament la solució de passivació que pot romandre a la membrana, aneu amb compte de no deixar que la membrana s'assequi després de la passivació, si voleu conservar-la per a un ús futur, heu d'afegir aigua destil·lada estèril per mantenir la membrana humida. els nostres enginyers per a solucions comunes de passivació.

 

Q10. La membrana d'ultrafiltració filtra les molècules jeràrquicament?

A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 per cent si s'utilitza una membrana d'ultrafiltració de 100 kd, però, les molècules més petites que la mida dels porus de la membrana no passen completament a través de la membrana lliurement. La taxa de retenció molecular de 67 kd és ​​de més del 70 per cent, i la proteïna de 43 kd també es talla més del 40 per cent, els diferents components d'una solució mixta passen per la membrana no són tan senzills i fàcils com una solució d'un sol component, a la pràctica , si voleu aïllar dues macromolècules, la diferència de pes molecular entre elles hauria de ser vuit vegades o més.

 

Q11. Com separar eficaçment les molècules grans i petites mitjançant ultrafiltració?

R: A causa de les necessitats del procés, s'eliminen les impureses de les macromolècules o s'eliminen les molècules petites de les macromolècules, és normal en la producció. És molt necessari triar la mida dels porus de la membrana, el mètode de filtració i les condicions de funcionament adequats. En termes generals, si es selecciona l'especificació MWCO de la membrana entre les dues proteïnes, es pot aconseguir una separació relativament ideal. Si la solució de proteïnes està relativament diluïda, operar a baixa pressió també ajudarà a aconseguir millors resultats. Trieu la filtració de flux tangencial i realitzeu una diafiltració múltiple per obtenir un millor efecte de separació.