Un procés eficient i de baix cost per a la clarificació i ultrafiltració de proteïnes recombinants que expressen llevats

L'expressió de llevats de gens exògens no només pot produir proteïnes i pèptids recombinants, anticossos i vacunes, citocines, factors de creixement, hormones i altres substàncies bioactives, sinó que també es pot utilitzar per produir enzims industrials, aliments funcionals i materials biològics, que té àmplies perspectives d'aplicació. .

 

El sistema d'expressió de llevats inclou dos sistemes d'expressió d'ús habitual, és a dir, el sistema d'expressió de saccharomyces cerevisiae i el sistema d'expressió de llevat metanotròfic. El sistema d'expressió de llevat de metanol és el sistema d'expressió de llevat més utilitzat actualment, i Pichia és el més utilitzat, que pot utilitzar metanol com a carboni i energia. A més, hi ha el llevat de Hansen, Sphaeroides, etc.

 

Independentment de quin tipus de sistema d'expressió de llevats, els seus processos de separació i purificació aigües avall són similars, i el flux de procés específic pren com a exemple l'expressió de llevats de proteïnes recombinants i fàrmacs polipeptídics.

 

Els cassets de membrana de microfiltració Guidling adopten un canal de flux obert i un mode de filtració de flux tangencial, que poden processar eficaçment líquids d'alimentació complexos com el líquid de fermentació de llevats i el líquid de craqueig d'E. coli a alta velocitat, i poden garantir l'amplificació lineal des de la petita prova fins a l'escala de producció. El disseny modular compacte, la connexió senzilla de la canonada, la independència i la llegibilitat del sistema poden protegir els operadors i prevenir la contaminació biològica. I sense verificació de manteniment i neteja. Per tant, és molt adequat per a l'etapa de clarificació del processament precoç aigües avall.

 

L'objectiu principal del procés UF/DF és eliminar les impureses i desplaçar els tampons. El casset de membrana d'ultrafiltració guiada té una bona homogeneïtat de la mida dels porus de la membrana i una forta hidrofilia, cosa que pot donar a la membrana un flux més alt i una menor adsorció de proteïnes, i un disseny optimitzat del canal de flux, amb una caiguda de pressió més petita, una transferència de material fàcil i un temps de filtració més curt. A més, la sèrie de productes és completa i flexible per satisfer les necessitats de diverses aplicacions de diferents escales. Per tant, és molt adequat per al pas UF/DF del processament aigües avall.

 

El següent és el cas d'aplicació de la membrana Guidlingcasseten l'expressió de llevats de proteïnes recombinants.

 

Aclariment per microfiltració

Hem utilitzat {{0}}, 11 metres quadrats de casset de membrana de porus de 0,22 μm per aclarir 1,5 L de líquid de fermentació de llevat (pes molecular de la proteïna objectiu 42-55 KD) mitjançant microfiltració. En tot el procés de microfiltració, es va investigar la taxa de recuperació de la proteïna objectiu, el canvi de terbolesa i l'esgotament del flux de membrana.

0-17min és el procés de concentració, 17-32min és el procés de rentat i filtració. Durant tot el procés de microfiltració, el TMP va augmentar gradualment, la velocitat d'entrada del líquid es va mantenir sense canvis i el flux mitjà de material va ser de 45LMH.

La terbolesa del líquid era de 600 NTU abans de la microfiltració i de 8 NTU després de la microfiltració, i la terbolesa va canviar òbviament.

Els resultats van mostrar que el rendiment de proteïna objectiu era > 90%. El casset de membrana Guidling Technology de 0,22 μm és estable i adequat per a aquest escenari d'aplicació.

 

Concentració d'ultrafiltració

 

 

Els resultats van mostrar que la proteïna objectiu estava completament atrapada. Els cassets de membrana Guidling Technology 10kd poden funcionar de manera estable i són adequats per a aquest escenari d'aplicació.

La majoria de les proteïnes recombinants expressades pel llevat no estaven molt expressades. La terbolesa del líquid filtrat es va reduir òbviament i la taxa de recuperació de proteïnes va ser més alta. Com que el temps cromatogràfic posterior és massa llarg, provocarà efectes adversos a la proteïna, per tal d'escurçar el temps de mostreig cromatogràfic, es pot afegir un pas de concentració d'ultrafiltració i la proteïna objectiu es pot concentrar ràpidament després de la mostra, que pot aconseguir el propòsit d'estalviar temps, reduir el volum de farciment i reduir així el cost de producció.

 

Els cassets de membrana de microfiltració de Guidling Technology generalment poden reduir la terbolesa del líquid d'alimentació a menys de 20 NTU, satisfent completament les necessitats d'ultrafiltració i cromatografia posteriors. La taxa de recuperació d'ultrafiltració dels cassets de membrana d'ultrafiltració variarà a causa dels diferents materials, la taxa de recuperació general pot arribar al 90-95%.

Guidling Technology us dóna la benvinguda a sol·licitar kits de prova per a una avaluació relacionada.

 

Sobre Guidling

Guidling Technology és una empresa nacional d'alta tecnologia centrada en productes biofarmacèutics, cultiu cel·lular, purificació i concentració de biomedicina, diagnòstic i fluids industrials. Hem desenvolupat amb èxit dispositius de filtre centrífug, cassets d'ultrafiltració i microfiltració, filtre de virus, sistema TFF, filtre de profunditat, fibra buida, etc. Que compleixen plenament els escenaris d'aplicació de biofarmacèutics, cultiu cel·lular, etc. Les nostres membranes i filtres de membrana s'utilitzen àmpliament en concentració, extracció i separació de prefiltració, microfiltració, ultrafiltració i nanofiltració. Les nostres moltes línies de productes, des de la petita filtració de laboratori d'un sol ús fins a sistemes de filtració de producció, proves d'esterilitat, fermentació, cultiu cel·lular i més, satisfan les necessitats de proves i producció. Guidling Technology està desitjant cooperar amb vosaltres!